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饲料中三聚氰胺的测定
饲料中三聚氰胺的测定
1　规模
本规范划定了用高效液相吃瓜91 法（HPLC）和气相吃瓜91 质谱法（GCMS）测定饲料中三聚氰胺的方式。高效液相吃瓜91 法为挑选法，气相吃瓜91 质谱法为确证法。
本规范合用于共同饲料，预混料、浓缩饲料、饲料增加剂、动物性卵白粉、宠物饲料中三聚氰胺的测定，方式*低定量限高效液相吃瓜91 法和气相吃瓜91 质谱法别离为2.0mg/kg和0.05mg/kg，高效液相吃瓜91 的*低检测浓度别离为0.5mg/kg。
2　规范性援用文件
以下文件中的条目经由过程本规范的援用而成为本规范的条目。但凡注日期的援用文件，其随后一切的点窜单（不包含订正的内容）或订正版均不合用于本规范，但是，鼓动勉励根据本规范告竣和谈的各方研讨是不是可以利用这些文件的*新版本。但凡不注日期的援用文件，其*新版本合用于本规范。
**法 高效液相吃瓜91 法
3　道理
试样中的三聚氰胺用1％三***提取，离心后取局部提取液，用阳离子互换柱污染，洗脱物器具有二极管阵列检测器的高效液相吃瓜91 仪停止定量。
4　试剂与资料
除非还有划定，仅利用阐发纯试剂。水为蒸馏水，吃瓜91 用水合适GB/T 6682**用水的划定。
4.1 甲醇：吃瓜91 纯。
4.2 乙睛：吃瓜91 纯。
4.3 氨水。
4.3 阳离子互换柱(SPE柱)：60mg，3mL或150mg，6mL。
4.4 1％三***：称取10g三***消融于1000mL水中。
4.5 5％氨化甲醇：量取5mL氨水，消融于100mL甲醇中。
4.6乙酸铅溶液（ρ（PbAc2）=22g/L）：取22g乙酸铅用约300mL水消融后定容至1L。
4.7 m，无机相m滤膜：0.45
4.8 三聚氰胺规范品（﹥99.0％）
4.9规范储蓄液（1mg/mL）：称取100mg（**到0.1mg）的规范品，用甲醇/水（2:8，V:V）消融并定容于100mL容量瓶中。
4.10 规范任务液：规范任务液根据须要逐级浓缩配制。
5 仪器与装备
5.1 高效液相吃瓜91 仪，配有二极管阵列检测器。
5.2 离心计心情：10000rpm
5.3 涡旋夹杂器
5.4 氮吹仪
5.5 固相萃取装配
5.6 高速匀质器
5.7 索式提取器
6 测定步骤
6.1 提取
6.1.1 动物卵白和饲料中三聚氰胺的提取
称取5.0g样品，精确插手48ml1％的三***溶液，插手2mL饱和醋酸铅溶液。摇匀，超声提取20min。取提取液约30mL转入离心管，在10000rpm离心计心情上离心5min。
6.1.2 宠物饲料中三聚氰胺的提取
称取5.0g样品，在索式提取器顶用乙醚回流6h去除脂肪。脱脂残渣精确插手48ml1％的三***溶液，插手2mL饱和醋酸铅溶液。摇匀，超声提取20min。取提取液约30mL转入离心管，在10000rpm离心计心情上离心5min。
6.2 污染
  m滤膜，滤液用于液相吃瓜91 测定。m MCX柱活化和上样：别离用3ml甲醇，3ml水活化MCX柱，精确移取10mL离心液分次上柱。再用3ml水和3ml甲醇洗濯MCX柱，抽近干后用5％氨化甲醇溶液（4.5）3ml洗脱。洗脱液于氮吹仪上50℃氮吹至干，用2+8甲醇水定容，过0.45
6.3 测定
6.3.1液相吃瓜91 前提
m；m4.6mm(i.d)，5´吃瓜91 柱：C8柱，150
柱温：室温
活动相：10+90（乙腈：10mM庚烷磺酸钠，10mM柠檬酸缓冲液）
检测波长：240nm
Lm进样量：20
根据试样中被测物的含量环境，拔取呼应值适合的规范任务液停止吃瓜91 阐发，根据保留时候和二极管阵列的紫外光谱停止定性，规范任务液应有五个浓度程度。规范任务液和待测样液中三聚氰胺的呼应值应在仪器线性呼应规模内。
6.4        成果计较和表述
根据下式计较试样中三聚氰胺的含量：

式中：
W－试样中三聚氰胺的含量，单元为毫克每千克（mg/kg）；
V－样品*终定容体积，单元为克（g）；
g/L）；mc－由规范曲线而得的样液中三聚氰胺的含量，单元为微克每升（
m－试样量，单元为克（g）。
n — 浓缩倍数。

6.5 成果表现
平行测定成果用算术均匀值表现，成果保留三位有用数字。

7反复性
在统一尝试室由统一操纵职员利用统一仪器实现的两个平行测定的绝对误差不大于10%

气相吃瓜91 －质谱法（确证法）
8 方式撮要
试样中的三聚氰胺用1％三***提取，用阳离子互换柱污染，用BSTFA衍生化，用气相吃瓜91 -质谱停止定性和定量阐发。
9 试剂和资料
衍生化试剂：N,O-双**基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）
其余同5
10 仪器和装备
气相吃瓜91 -质谱，别的同6
11 阐发步骤
前处置同6.1和6.2
11.1 衍生化
L的BSTFA，混匀，在70℃衍生30min。同时用三聚氰胺规范系列做同步衍生。mL的吡啶和200m将6.2的污染液吹干，插手200
测定
11.2 气相吃瓜91 －质谱前提
柱子：DB-5MS柱
载气：He 流速: 1.3 ml/min 均匀线性速率: 35 cm/sec 压力: 17.5 psi (initial)形式:恒流
进样：不分流或分流进样 (1:20)，进样体积为1µl，进样温度: 250ºC
升温法式：肇端温度为75ºC，延续1.0 min，以30ºC/min升温至300ºC，坚持2.0min。传输线温度为280ºC。
运转时候:  10.5 min
质谱前提：品质规模: 40-450 amu
扫描形式：全扫描 (Electron Ionization)
溶剂提早:  4.2 min (splitless); 3.8 min (split)
四极杆: 150ºC
离子源: 230ºC
监测离子：特点离子 171，99，73；份子离子：327，342
11.3 定性定量方式
定性方式：样品与规范品保留时候的绝对规范误差不大于0.5%。特点离子基峰百分数与规范品相差不大于20％。
定量方式：挑选离子监测（SIM）法计较峰面积，单点或多点校准法定量。
12 成果结算和表述
根据下式计较试样中三聚氰胺的含量：

式中：
W－试样中三聚氰胺的含量，单元为毫克每千克（mg/kg）；
V－样品*终定容体积，单元为克（g）；
g/L）；mc－由规范曲线而得的样液中三聚氰胺的含量，单元为微克每升（
m－试样量，单元为克（g）。
平行测定成果用算术均匀值表现，成果保留三位有用数字。
13 许可差
取平行测定成果的算术均匀值为测定成果，两个平行测定的绝对误差不大于20％。
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